לוח הזמנים של התחזוקה של אמבולנסים תואם בדרך כלל לתקני תחזוקת רכב מנועי לאומיים ולמפרט הטכני של יצרן הרכב, תוך שילוב פרוטוקולי ניהול משופרים כראוי המותאמים למאפיינים התפעוליים הספציפיים של רכבי חירום. בדרך כלל, אמבולנסים כפופים למערכת תחזוקה מקיפה המשלבת בדיקות יומיות, תחזוקה מתוזמנת ובדיקות טכניות מיוחדות כדי להבטיח שהרכב נשאר במצב של מוכנות תפעולית בכל עת.
יש לערוך בדיקות בסיסיות הן לפני ואחרי כל משלוח. בדיקות אלו מכסות את מצב המנוע, מערכת הבלימה, לחץ האוויר בצמיגים, תאורת חירום ומערכות הצפירה, וכן את המצב התפעולי של ציוד רפואי על הסיפון; יש לטפל באופן מיידי בכל בעיה שזוהתה. תחזוקה מתוזמנת מבוצעת בדרך כלל על סמך קילומטראז' או מרווחי זמן-לדוגמה, ביצוע שירות בסיסי בכל מרחק ספציפי שנסע (לדוגמה, 5,000 עד 10,000 קילומטרים) או כל שלושה חודשים. שירות זה כולל משימות כגון החלפת שמן מנוע ומסנן שמן, ובדיקת השלדה וכן מערכות הידראוליות וחשמליות.
לגבי הציוד הרפואי המותקן באמבולנס-כגון צגי א.ק.ג, דפיברילטורים ומערכות אספקת חמצן-יש לקבוע לוח זמנים תחזוקה נפרד. התקנים אלו צריכים לעבור כיול ובדיקות קבועות בהתאם לתקנות ניהול הציוד הרפואי. יתר על כן, לאחר תקופות של פעולה ממושכת,-בעצימות גבוהה או השלמת משימות מיוחדות, הרכב והציוד שלו חייבים לעבור שיפוץ טכני מיוחד כדי להבטיח שהיחידה כולה שומרת באופן עקבי על רמה גבוהה של אמינות ובטיחות.
